Pembubaran polipeptida
Setiap asam amino memiliki sifat kimia yang melekat dan kelarutan suatu peptida bergantung pada urutan dan modifikasinya. Kami merekomendasikan mengambil sejumlah kecil peptida untuk pengujian kelarutan sebelum melarutkan semua peptida.
Melarutkan peptida adalah langkah yang sangat penting. Pelarutan yang tidak tepat dapat mengakibatkan hilangnya peptida atau kegagalan percobaan. Kelarutan peptida terutama bergantung pada urutan peptida, jadi perhatikan saat merancang peptida. Direkomendasikan agar rangkaian peptida mengandung 20% residu bermuatan untuk meningkatkan kelarutannya.
Sebelum digunakan, pelanggan dapat mengikuti tiga prinsip dasar berikut untuk memilih pelarut yang sesuai untuk melarutkan peptida.
Pertama, pelarut yang dipilih harus mampu melarutkan peptida sepenuhnya; Kedua, pelarut yang dipilih harus sesuai dengan kondisi percobaan; Terakhir, pelarut yang dipilih tidak boleh bereaksi dengan atau menurunkan peptida.
Selama jumlah peptida memungkinkan, Anda dapat melarutkan sebagian kecil peptida terlebih dahulu, lalu melarutkan seluruh sampel. Jika Anda perlu memperoleh kembali peptida dari pelarut, Anda dapat memilih pelarut awal yang memudahkan penghilangannya setelah liofilisasi.
Saran berikut dapat membantu Anda melarutkan peptida:
Peptida dengan kurang dari 5 asam amino umumnya larut dalam larutan air, dan asam amino sangat hidrofobik (W, I, L, F, M, V, Y) kecuali.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25%Asam amino bermuatan (E, D, K, R, H) dari peptida hidrofilik dan mengandung<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25%Asam amino bermuatan mungkin juga tidak larut atau larut sebagian dalam air. Yang terbaik adalah melarutkan peptida terlebih dahulu dalam jumlah minimum pelarut organik kuat seperti DMF, ACN, Isopropil alkohol, etanol, asam asetat, GdnHCl 4-8 M, urea, atau DMSO (tidak dalam urutan C, W, M), dan pelarut organik serupa lainnya. Yang terbaik adalah menambahkan perlahan pelarut organik yang melarutkan peptida ke dalam larutan berair setetes demi setetes. Jika larutan menjadi keruh, mungkin larutan telah mencapai batas kelarutan dan tidak ada gunanya terus melarutkannya. Perlu dicatat bahwa pelarut yang dipilih pada awalnya harus kompatibel dengan sistem eksperimental.
Hydrophobic amino acid content >75% Peptida yang sangat hidrofobik umumnya juga tidak larut dalam larutan air. Peptida tersebut juga harus diolah terlebih dahulu dengan pelarut organik kuat (misalnya TFA, asam format) yang larut dan juga dapat mengendap jika ditambahkan ke dalam larutan berair. Larutan peptida akhir mungkin memerlukan pelarut organik konsentrasi tinggi untuk mengubah sifatnya, dan pelarut organik umumnya tidak digunakan untuk studi fungsi biologis dalam sel hidup.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Urutan polipeptida cenderung membentuk jaringan ikatan hidrogen antarmolekul yang berlebihan dan dengan mudah membentuk gel dalam larutan berair pekat. Peptida tersebut dapat dilarutkan seperti dijelaskan pada langkah 3. Untuk mengurangi kemungkinan masalah selama pembubaran, disarankan agar pelanggan lebih memperhatikan desain dan urutan untuk meningkatkan kelarutan peptida.